樣品質量或體積過載和使用錯誤的樣品溶劑都會造成色譜柱性能的顯著降低,由此損害分離效果。注射進樣體積不得超過流速的10%(比如,在流速為1毫升/分鐘時,注射進樣體積<100微升)。樣品進樣量高出吸附等溫線的線性部分就意味著上樣量過載。這條分界線不一而足,原則上,每毫升柱體積上不得承載超過0.01毫克的樣品(比如,在4.6 X 250 毫米色譜柱上zui大上樣量為22微克)。如果因為檢測精度需要,上樣量還是可以再上調。樣品溶劑內的強移動相組分(反相模式下脂肪醇、乙腈,或者正相模式下脂肪醇、乙酸乙酯等)含量不得超過它們在工作移動相中的濃度。